称取经干燥粉碎的甜菊叶片，置于烧杯中，加水，在沸水浴中浸提，过滤于容量瓶中，将残渣加水后，再在沸水浴中加热浸提，将浸提液过滤于容量瓶中，如此反复3～4次，收集滤液于容量瓶中，用水定容。吸取过滤液，置于烧杯中，加入硫酸铝，溶解后用氢氧化钠调至pH=7，放置1 h。然后将其过滤于分流漏斗中，并用少量水洗涤滤纸及黄色沉淀物，用水饱和正丁醇萃取过滤液3次，弃去水层，合并正丁醇提取液于回收旋转浓缩装置中，减压回收正丁酸至底瓶恰好蒸干为止。用水将瓶内的甜菊苷经多次冲洗移入容量瓶中，最后用水定容至刻度，摇匀，备用。
蒽酮硫酸溶液加入到样液或标准液时，最好把试管放入冰浴中，用环形玻璃棒在样液中不断搅拌，使作用液均匀地冷却。样液必须清澈透明，呈不同的深浅绿色，加热后不应有蛋白质沉淀存在。本法检出线为20.0～100.0 μg。在操作过程中，加入蒽酮硫酸的浓度和量，以及加热时间前后要一致才能取得正确结果。同时本法与气相色谱法对比，回收率达80%以上，而操作时间可以大大地缩短。
13.6.3.3几种方法的比较
气相色谱法定量准确，但操作过程复杂，时间长，样品中甜菊糖苷的提取涉及多种有机溶剂。而蒽酮相对操作时间短，但回收率比气相色谱法低。此外，甜菊糖苷还可以采用重量法、液相色谱法、薄层色谱法等法检测。其中，重量法简单易行，但具有操作条件差，分析过程冗长，分析结果平均相对偏差大，重现性差等缺点；液相色谱法快速、准确，一般一个样品只需10 min左右，其灵敏度也远远超过化学分析法，但其缺点是必须有标样。薄层色谱法能准确地进行定性定量分析，尤其是对甜菊苷进行定性分析可以说是最简单的快速分析方法。它不要求对样品进行仔细处理，设备也很简单，适合一般单位采用，但定量分析则不够精确。
食品基质条件复杂，且食品中的甜味剂常多种同时使用，因此应研究适合所有食品中甜菊糖苷及能同时测定多种甜味剂的检测方法。
13.7着色剂的测定
食用色素是以食品着色、改善食品的色泽为目的的食品添加剂，可分为食用天然色素和食用合成色素两大类。天然色素是从动植物组织中提取的，其安全性高，但稳定性差，着色能力差，难以调出满意的色泽，且资源较短缺，目前还不能满足食品工业的需要；合成色素具有稳定性好、色泽鲜艳、附着力强、能调出任意色泽等优点，因而得到广泛应用，但由于许多合成色素本身或其代谢产物具有一定的毒性、致泻性与致癌性，因此必须对合成色素的使用范围及用量加以限制，确保其使用的安全性。GB 2760-2011规定了各类食品中各种着色剂的使用限量， 其中日落黄为 0.025～0.6 g/kg、 亮蓝为0.025～0.5 g/kg、 苋菜红为0.05～0.3 g/kg、喹啉黄为0.1 g/kg、专利蓝为0.05～0.5 g/kg、柠檬黄为0.05～0.5 g/kg、靛蓝为 0.05～0.3 g/kg、胭脂红为0.05～0.5 g/kg、诱惑红为0.3 g/kg，而酸性红52、红色2G和酸性红26为不得添加物质。
在食品行业中使用单一色素已较少，需使用复合色素方可达到较满意的色泽，因而给其分析测定带来了一定困难。
食品合成色素测定方法有多种，国家标准方法有高效液相色谱法、薄层色谱法、示波极谱法。国内文献报道的检测方法有紫外-可见吸收光谱法、分光光度法、微柱法、纸层析法、毛细管电泳法、HPLC-MS法，毛细管胶束电动色谱法等，现代仪器分析方法已经成为色素分析的主流。
13.7.1高效液相色谱法
食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性和与峰面积比较进行定量。
橘子汁、果味水、果子露汽水等含CO2样品加热驱除CO2。配制酒类加小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。硬糖、蜜饯类、淀粉软糖粉碎样品，放入小烧杯中，加水温热溶解，若样品溶液pH值较高，用柠檬酸溶液调pH值到6左右。巧克力豆及着色糖衣制品放入小烧杯中，用水洗涤色素，到巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。
本方法最小检出限，新红5 ng，柠檬黄4 ng、苋菜红6 ng、胭脂红8 ng、日落黄7 ng、赤藓红18 ng、亮蓝26 ng，当进样量为0.025 g时最低检出浓度分别为：0.2 mg/kg；0.16 mg/kg；0.24 mg/kg、0.32 mg/kg、0.28 mg/kg、0.72 mg/kg、1.04 mg/kg。
13.7.2薄层色谱法
在酸性条件下，用聚酰胺吸附水溶性合成色素，而与天然色素、蛋白质、脂肪、淀粉等物质分离。然后在碱性条件下，用适当的溶液将其解吸，再用薄层层析法进行分离鉴别，与标准比较定性、定量。最低检出量50.0 μg，点样量为1.0 g，样品最低检出浓度约为50.0 mg/kg。
样品处理：果味水、果子露、汽水需加热驱除CO2。配制酒于烧杯中，加碎瓷片数块，加热驱除乙醇。硬糖、蜜饯类、淀粉软糖加水，温热溶解，若样液pH值较高，用柠檬酸溶液调至pH=4左右。奶糖加乙醇-氨溶液溶解，置水浴上浓缩，立即用硫酸溶液调至微酸性再加硫酸(1+10)，加钨酸钠溶液，使蛋白质沉淀、过滤，用少量水洗涤，收集滤液。蛋糕类样品，加海砂少许，混匀，用热风吹干用品(用手摸已干燥即可以)，加入石油醚搅拌，放置片刻，倾出石油醚，如此重复处理3次，以除去脂肪，吹干后研细，全部倒入G3垂融漏斗或普通漏斗中，用乙醇-氨溶液提取色素，直至着色剂全部提完。置水浴上浓缩至约20 mL。
